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葡糖淀粉酶抗体的应用

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葡糖淀粉酶抗体的应用


背景[1-3]

葡糖淀粉酶抗体是可以特异性结合葡糖淀粉酶的一类多克隆抗体,主要用于检测葡糖淀粉酶的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理:双抗体夹心法测定标本中葡糖淀粉酶水平。用纯化的葡糖淀粉酶抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入葡糖淀粉酶,再与HRP标记的葡糖淀粉酶抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的葡糖淀粉酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中葡糖淀粉酶浓度。

葡糖淀粉酶主要来自枯草杆菌、微生物细菌和曲霉。常采用枯草芽孢杆菌BF7658作为生产菌,以黄豆饼粉(4%~6%)、玉米粉(4%~10%)及一些无机盐为培养基,深层培养40~48h;发酵液用酒精沉淀或硫酸铵盐析即得产品,为了便于保藏,常加入适量的碳酸钙作为抗结剂。黑曲霉变种、米曲霉变种、泡盛曲霉或传统上用于食品的酵母菌、或木霉变种、米根霉变种、地衣形芽孢杆菌在控制条件下发酵培养而成。

葡糖淀粉酶,能水解液态淀粉中的α-1.4糖苷键和α-1.6糖苷键。在水解过程中,由底物分子中的非还原端开始,逐步水解出葡萄糖。水解的速度依赖于的糖苷键的类型和链长。该酶能水解液态淀粉中的α-1.4糖苷键和α-1.6糖苷键。在水解过程中,由底物分子中的非还原端开始,逐步水解出葡萄糖。水解....


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