胰酶细胞消化液(含酚红)的应用
背景[1-3]
胰酶细胞消化液(含酚红)0.25%胰酶、0.02%EDTA和酚红,pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。
贴壁细胞的消化:
1、吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
2、加入少量胰酶细胞消化液,略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。
3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化,或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来;此时吸除胰酶细胞消化液;加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
4、如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。
5、如果发现细胞消化时间过长,细胞已经有部分直氨基树脂接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
组织的消化:不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项:
1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
2、胰酶细胞消化....
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