人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISAKIT的应用
背景[1-3]
人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人糖磷脂酰肌醇(GPI)水平。用纯化的人糖磷脂酰肌醇(GPI)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人糖磷脂酰肌醇(GPI),再与HRP标记的人糖磷脂酰肌醇(GPI)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖磷脂酰肌醇(GPI)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人糖磷脂酰肌醇(GPI)浓度。
GPI的核心结构由乙醇胺磷酸盐、三个甘露糖苷、葡糖胺以及纤维醇磷脂组成。一般来说,任何蛋白的GPI锚都不是同质的,而是一系列同系物的混合体。GPI锚定蛋白的C末端是通过色素碳黑乙醇胺磷酸盐桥接于核心聚糖上,该结构高度保守,另有一个磷脂结构将GPI锚连接在细胞膜上。核心聚糖可以被多种侧链所修饰,比如乙醇胺磷酸盐基团,甘露糖,半乳糖,唾液酸或者其他糖基。一些复杂的侧链结构如N-乙酰氨基半乳糖在哺乳动物和原虫中都发现。另外,像1,2-二酰基甘油,1-烷基-2酰基甘油,单酰基甘油以及神经酰胺都可作为GPI锚结构的类脂成分。而且某些GPI锚定蛋白的酰基取代基也可能是功能结构的一部分。这些酰基基团通过抑制磷酸盐的形成来使GPI锚不受PI-PLC(phosphat-idylinosito-l specific phospholipase C)的影响。
应用[4][5]
用于GPI锚定型CD80-CD58融合基因在真核细胞中的表达、....
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